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제품 상세 정보:
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| 생산품명: | 큐피크레 | 저장 온도: | -20 'Ｃ |
|---|---|---|---|
| cdna 합성을 위해 강건하고 활동적입니다: | 최고 55까지' Ｃ. | 애플리케이션: | PCR |
| 음량: | 1 밀리람베르트 | 역전사: | 온도 범위 (42-60' Ｃ) |
| 하이 라이트: | 유니버셜 QPCR 마스터 믹스,템플릿 희석 버퍼 QPCR 마스터 믹스,QPCR 마스터 믹스 생화학 시약 |
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40×Yellow 템플릿 희석 버퍼와 2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스
2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스에 대한 도입 :
이 상품은 GSK 그린 I 비현실적 형광법을 이용하여 큐피크레를 위한 2x 프리믹스 용액입니다. 핵심 구성 요소, 타크 dna 폴리머라제는 항체 방법의 차단된 감열성 dna 폴리머라제이며, 그것이 효과적으로 저온 환경 하에 비특수 증폭을 억제할 수 있습니다. 한편, 반응 버퍼가 큐피크레에 대해 최적화된 채로 결합되어 타크 dna 폴리머라제는 매우 높은 전문성과 력 큐피크레 반응에 적합합니다. 좋은 표준 곡선은 타겟 유전자들의 정량 분석을 위해 재생할 수 있고 믿을 만한 정확한 넓은 양적 지역에서 획득될 수 있습니다. 동시에, 이 제품은 모든 큐피크레 악기의 용도에 적합한 특별한 록스 수동적 참고 염료를 포함하고 록스 집중을 다른 악기에 맞추기 위한 어떤 필요가 없습니다. 청염료는 추가한 샘플의 탐침 효과를 가지고 있는 프리믹스에 추가되고 노란 템플릿 희석액이 동시에 제공됩니다. 템플릿이 노란 템플릿 희석액으로 희석되고, 푸른 반응 프리믹스에 부가했을 때, 반응 시스템 프로세스의 준비로 탐침 역할을 하고 누출 또는 미사드디션을 방지할 수 있는 색은 파란색에서 녹색으로 변합니다. 푸르고 황색 염료의 스펙트럼은 큐피크레 염료와 겹치지 않고, 반응 결과에 영향을 미치지 않습니다.
2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스의 제품 정보 :
| 상품 이름 | 제품의 식별 | 모델 |
| 40×Yellow 템플릿 희석 버퍼와 2×Universal 청록색 큐피크레 마스터 믹스 | GS-MBP0044-01 | 1 밀리람베르트 |
| GS-MBP0044-05 | 5×1 mL | |
| GS-MBP0044-15 | 15×1 mL |
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40×Yellow 템플릿 희석 버퍼와 2×Universal 청록색 큐피크레 마스터 믹스와 저장과 취급 상태 :
습식 빙낭 운송 ; 12개월에 효과적인 -20C 온도에 저장됩니다.
어세이 프로토콜 / 절차 :
1. 2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스의 (선택적) 템플릿 희석 :
이 장비는 40x 노랑 템플릿 희석 버퍼, 템플릿이 액체의 색을 변경함으로써 큐피크레 반응 유체에 추가되었는지 정확하게 결정하는데 사용될 수 있는 40 배 약해진 노란 템플릿 희석을 제공합니다. 한 예로 20ul 큐피크레 반응 시스템을 잡을 때, 희석에 따르면 템플릿 양은 20ul 큐피크레 반응 용액에 부가했습니다, 원래 템플릿의 상응하는 농도법이 다음 표로 참고될 수 있습니다 (한 예로 100ul으로 희석된 데 원래 템플릿이 필요합니다) :
| 약해진 템플릿을 20ul 큐피크레 반응 솔루션(ul)에 더하세요 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 40x 노랑색 템플릿 희석 버퍼를 100ul 템플릿 희석 시스템(ul)에 더하세요 | 50 | 25 | 16.7 | 12.5 | 10 | 8.4 | 7.2 | 6.3 |
| 100ul 템플릿 희석 계열을 중요한 템플릿(ul)에 더하세요 | Ｘ | Ｘ | Ｘ | Ｘ | Ｘ | Ｘ | Ｘ | Ｘ |
| 뉴클레아제 - 무료 물(ul)를 추가하는 볼륨 | 50 Ｘ | 75 Ｘ | 83.3 Ｘ | 87.5 Ｘ | 90 Ｘ | 91.6 Ｘ | 92.8 Ｘ | 93.7 Ｘ |
예 :
2ul 약해진 템플릿은 20ul 큐피크레 반응 시스템에 추가되어야 합니다.
한 예로 100ul 템플릿 희석 계열을 잡을 때, 원래 템플릿이 량은 20ul일 때, 25ul 40x 노란 템플릿 희석 버퍼는 추가되고 그리고 나서 무뉴클레아제 물 55ul이 100ul의 전체 양에 추가됩니다.
40x는 지금 노랑색 템플릿 희석 버퍼는 10x입니다. 20ul으로의 약해진 템플릿의 에드 2ul은 희석 희석 버퍼와 마지막 40× 노랑색 템플릿 희석 버퍼는 1x입니다. 결론적으로, 노란 템플릿 희석 버퍼는 마지막 큐피크레 시스템에서 1x여야 합니다.
기록 : 템플릿이 희석될 필요가 없으면, 또는 G3362-2의 템플릿 희석액이 사용되지 않으면, 당신은 이 단계를 무시할 수 있습니다.
2. 2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스에 관한 큐피크레 반응 시스템에게 다음을 권하세요 :
| 성분 | 20ul 르크스킨 | 50ul 르크스킨 | 마지막 집중 |
| 2×Universal 푸른 SYBR 녹색이 큐피크레 마스터 믹스 | 10ul | 25ul | 1× |
| 전향 프라이머 (10uM)a | 0.4ul | 1ul | 0.2uM |
| 역방향 프라이머 (10uM)A | 0.4ul | 1ul | 0.2uM |
| 템플릿비 | 변수 | 변수 | 필요에 따라 |
| 무뉴클레아제 물 | 20ul에 추가하세요 | 50ul에 추가하세요 |
a. 보통, 좋은 증폭 효과는 0.2 um의 최종 농도에 의해서 획득될 수 있습니다. 반응 성능이 가난할 때, 프라이머 농도는 0.2-1.0um의 더 레인지에서 조정될 수 있습니다.
비. 템플릿 추가의 양은 템플릿 솔루션에서 타겟 유전자의 복사 갯수에 따라 변화하고 템플릿 추가의 적절한 양이 경사진 희석에 의해 논의됩니다. 20ul 반응 시스템에서 주형 dna의 최고 추가량은 100 NG (좋지않다) 이했습니다. RT-PCR 반응의 상보DNA (RT 반응 용액이) 템플릿으로서 사용되었을 때, 추가량은 PCR 반응 용액의 전체 양 중 10%를 초과하여서는 안됩니다.
3. PCR 반응 절차 (기구에 따라 조정될 수 있습니다) :
a : 만약 증폭 전문성이 향상될 필요가 있다면, 2단계 절차 또는 어닐링 온도가 사용될 수 있습니다 ; 증폭 효율을 향상시키기 위해, 3단계 절차 또는 연장 시간은 사용될 수 있습니다.
기록 :
1. RNA 가수분해효소 오염물을 피하기 위한 작동 동안 일회용 장갑을 착용하세요.
2. 역전사 산물은 짧은 시간 동안 -20C에 저장될 수 있습니다. 만약 장기 저장이 필요하면, 그것이 되풀이된 냉동-해동 주기를 회피하기 위해 포장된 후에 -80C에 그들을 저장한다고 추천받습니다.
3. 템플릿이 있다면 유카로틱 원점의, 그것이 전-길이 cdna의 최고 수율을 획득하기 위해 올리고 (dT)18 프라이머를 선택하고 그것과 진핵 mrna의 3' 폴리아데닐산 열을 짝짓는다고 추천받습니다.
4. 원핵 생물 RNA의 역전사를 위해, 랜덤 헥사머 프라이머 또는 유전자 특이 프라이머는 사용되어야 합니다.
5. 랜덤 헥사머 프라이머는 넓은 응용성을 가지고 있고, ｍＲＮＡ, 르르나, 전이리본 핵산, RNA 소 리보핵산과 라이n르나 템플릿에 적합합니다.
6. 역전사 뒤에 큐피크레 분석이 이어지면, 정량적 결과의 신뢰성과 반복성을 향상시키기 위해 돕는 올리고 (dT)18 프라이머와 랜덤 헥사머 프라이머는 ｍＲＮＡ의 모든 지역의 cdna 합성 효율성을 똑같은 것 만들기 위해 섞일 수 있습니다.
7. 만약 차후 큐피크레 프라이머가 엑손을 가로질러 설계되면, 게놈 제거 단계가 빠질 수 있습니다.
프라이머 디자인 원리 :
1. 증폭 제품의 길이는 80-300 베이시스 포인트의 사이에 있다고 추천받습니다 ;
2. 프라이머 길이 : 18-25 베이시스 포인트 ;
3. 프라이머에서 토대 G+C의 내용은 40%-60%의 사이에 있어야 합니다 ;
4. Tm은 정방 프라이머와 역방향 프라이머 사이의 값 차이는 2C 이하고 58-62C 사이의 Tm 가치가 최고입니다 ;
5. 토대 배포의 무작위성 ;
6. 프라이머는 자가 보완적 순서를 포함하지 않는게 좋을 것이었습니다, 그렇지 않았다면 그들이 이차적 헤어핀 구조를 형성할 것입니다 ;
7. 불과 4 보완적이 또는 일치하는 토대의 2개 프라이머 사이에 있어야 합니다, 그렇지 않았다면 프라이머 이량체가 형성될 것입니다, 3에' 특히 보완적 중첩이 끝납니다 ;
8. 프라이머의 3' 단자 베이스는 Ｇ 또는 Ｃ라는 것 제안됩니다 ;
9. 어떤 다른 비특이적 산물도 NCBI 비교 결과에서 발견되지 않았습니다.
통상적인 문제와 해결책 :
| 문제점 설명 | 가능한 이유 | 솔루션 |
| 반응의 끝에, 어떤 증폭 곡선도 나타나지 않았거나 CT 가치가 너무 늦게 보였습니다 | 템플릿 농도는 너무 낮습니다 | 템플릿 희석 배수를 감소시키기 위해 실험을 반복하고, 샘플 농도가 알려지지 않을 때 최고 농도에서 시작하세요 |
| 템플릿 퇴보 | 템플릿은 다시 준비되었고 실험이 반복되었습니다 | |
| 시스템에서 PCR 억제제가 있습니다 | 일반적으로, 템플릿은 반입되, 템플릿의 희석률이 증가되 또는 고순도와 템플릿이 다시 준비되고 반복됩니다 | |
| 프라이머는 떨어질 수 있습니다 | 오랫동안 사용되지 않는 프라이머는 퇴보의 가능성을 배제하기 위해 처음으로 페이지 전기영동에 의해 완전성에 대하여 시험되어야 합니다 | |
| 낮은 증폭 효율 | 프라이머 농도를 n레아세 또는, 3-단계 증폭 절차를 시도하거나, 프라이머를 재도안하세요 | |
| 증폭 제품은 너무 깁니다 | 증폭 제품 길이는 80-300 베이시스 포인트의 더 레인지로 제어되었습니다 | |
| 공백 대조구는 신호를 보여줍니다 | 반응 시스템 오염 | 첫째로, 비어 있는 물 통제는 대체되어야 합니다. 만약 똑같은 상황이 여전히 발생하면, 프라이머, 흡인 장치와 PCR 튜브가 대체되어야 하거나 새로운 마스터 믹스가 시작되어야 합니다. 반응 시스템은 분무기 오염을 줄이기 위해 최고 클리인 테이블에서 준비됩니다 |
| 프라이머 이량체와 같은 비특이적 증폭은 나타납니다 |
일반적으로, 용해 곡선에 의해 분석되어야 한 35번 주기 뒤에 공백 대조구에 나타나는 것은 증폭 제품을 위해 정상적입니다. 프라이머를 재도안하거나, 프라이머 농도를 조정하거나 PCR 반응 절차를 최적화하세요 |
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| 용해 곡선은 다중 피크 값을 가지고 있습니다 | 프라이머 디자인은 가난합니다 | 새로운 프라이머는 프라이머 계산 원칙에 따라 재도안되었습니다 |
| 프라이머 농도는 너무 높습니다 | 적절하게 프라이머 농도를 감소시키세요 | |
| cdna 템플릿에서 유전자 오염이 있습니다 | 추출된 RNA 솔루션은 유전자 오염을 제거하고 트랜스인트론 프라이머를 설계하기 위해, 드스드나스와 같은 DNA 효소를 사용하여 소화됩니다 | |
| 실험의 부족한 재현성 | 추가한 샘플의 에러는 큽니다 |
고급 품질 흡입 양정 정확한 피펫으로, 정확한 피펫의 사용 ; 샘플링 에러를 줄이기 위해 대 용적 템플릿을 추가한 고희석 템플릿 ; 큐피크레의 반응 부피는 확대되었습니다 |
| 템플릿 농도는 너무 낮습니다 | 템플릿의 희석 시간을 줄이기 위해 실험을 반복하세요 | |
| 다양한 위치의 큐피크레 기구에 있는 온도 편차 | 정기적으로 큐피크레 기구를 측정하세요 | |
| 증폭 곡선은 매끄럽지 않습니다 | 형광신호는 너무 약하고 시스템 수정 뒤에 생산합니다 |
마스터 믹스에서 사용 전에 혼합된 염료가 떨어뜨려지지 않는다는 것을 보증하세요 ; 더 좋은 큐피크레를 수집하기 위해 형광 신호를 대체합니다 소비재의 |
| 증폭 곡선은 깨지거나, 미끄러집니다 | 템플릿 농도는 더 높았고 기준선 종점값이 CT 가치보다 더 컸습니다 | 기준선 종점 (Ct 가치 -3)는 감소되었고 정보가 재분석되었습니다 |
| 개별적 웰스의 증폭 곡선은 갑자기 날카롭게 떨어졌습니다 | 반응관에서 버블이 있습니다 |
혼합이 완전히 해산된다는 것을 보증하고, 소용돌이 치고 고르게 흔들리지 마세요 ; 샘플이 추가된 후, 버블은 가벼운 엘라스틱과 원심분리에 의해 제거됩니다. 변성전 시간은 버블을 제거하기 위해 10 분으로 확장되었습니다 |
당신이 미안하지만, 40×Yellow 템플릿 희석 버퍼와 2×Universal 푸른 GSK 녹색이 큐피크레 마스터 믹스에 관한 더 많은 정보를 필요로 하면 온라인으로 알고 당신에게 감사하도록 하세요 .
담당자: Ms Kris
전화 번호: +8613049739311
