빠른 DNA 소화 5-15Min 효소 브스아이 생화학 시약 CE는 찬성했습니다

효소 브스아이

효소는 5-15 분에 빠른 DNA 소화를 위한 일련의 설계된 제한 엔자임입니다. 효소는 PCR 생성물과 더불어 플라스미드, 유전자이고 바이러스 dna를 소화하는데 사용될 수 있습니다. 모든 효소는 보편적 버퍼에서 우수한 활동을 보이고 그렇게 효소 소화 반응 시스템을 단순화했습니다. 게다가, 초과한 기질 또는 힘든 템플릿의 쉬운 소화를 허락하면서, 효소는 우수한 효소 과잉을 제공합니다.

출하 및 저장

성분은 아이스펙으로 수송되고, 2년간 -20' Ｃ에 저장될 수 있습니다.

자르는 사이트

5'-GGTCTC(N)1↓-3'

3'-CCAGAG(N)5↑-5'

추천된 반응 조건

1× 프유니컷티엠은 버퍼링합니다 ; 37C에 잠복하세요.

가열불활성화

20 분 동안 80C에 있는 인큐베이션.

품질 관리

1. 활동 정의 : 1 μg pPIC9K DNA는 완전히 20 μL의 총 반응 부피에서 37C에 15 분의 효소 1 μL에 의해서 소화되었습니다.

2. 장기 잠복 / 스타 활성 분석 : 뉴클레아제 오염 또는 스타 활성 때문의 1 μg pPIC9K DNA의 어떤 발견 가능 열화도 37C 에서 3시간 동안 1 μL의 프유니컷티엠 브스아이를 배양하는 동안 발생하지 않았습니다. 더 오랫동안 인큐베이션은 스타 활성의 결과가 될 수 있습니다.

3. 잡아매기와 재균열 (L/R) 분석 : 소화된 후 최적 조건 하에 1μL 효소와 함께, 소화로부터의 재활용 제품은 22C에 T4 dna 리가아제 하에 묶을 수 있습니다. 라이게이션 생성물은 효소에 의해 레클에바게드.

4. 독특하지 않은 엔도뉴클레아제 활성 : 37C 에서 4시간 동안 1 μg 슈퍼코일 플라즈미드 dna와 1 μL 효소의 인큐베이션은 어떤 슈퍼코일 조건 변화의 결과가 되지 않았습니다.

교육

1. 다른 DNA의 빠른 소화를 위한 프로토콜

1.1 나타낸 명령에서 얼음에서의 다음과 같은 반응 성분을 결합시키세요 :

[기록] : *For는 PCR 생성물을 정화했습니다. 10× 프유니컷티엠 버퍼의 양은 정화되지 않은 PCR 생성물에서 남아있는 이온 강도로 인해 2 μL으로 감소할 수 있습니다. PCR 생성물은 PCR 생성물이 클로닝해서 사용될 것일 때 정제된 이전 소화라고 추천받았습니다.

1.2 혼합은 점잖게 (소용돌이치게 하지 않고) 아래 회전합니다.

1.3 (플라즈미드 dna) 15 분 동안 또는 (PCR 생성물) 15-30 분 동안 또는 30-60 분 (게놈 dna) 동안 37C에 잠복하세요.

1.4 선택적입니다 : 80C에 20 분 동안 가열됨으로써 효소를 비활성화시키세요.

2. DNA의 두배이고 다수 소화

2.1 각각 효소 중 1 μL을 사용하고 적절하게 반응 조건을 비율에 따라 늘이세요.

2.2 반응 혼합물에서 효소의 합체된 부피는 총 반응 부피 중 1/10을 초과하여서는 안됩니다.

2.3 만얍니다 효소가 다양한 반응 온도를 요구하고 하부 온도를 요구하는 효소로 시작하면, 두번째 효소를 추가하고 더 높은 온도에 잠복하세요.

3. 플라즈미드 dna 온침 반응을 비율에 따라 늘이기

[기록] : 물 온도조절 장치, 금속 온도조절 장치 또는 모래 온도조절 장치에서 인큐베이션. 총 반응 부피가 20 μL을 초과하면 인큐베이션 시간 증가하세요.

DNA의 인식 부위의 번호